EZ Trans慢病毒包裝試劑盒

產(chǎn)品描述

和元李記EZ Trans慢病毒包裝試劑盒（EZ Trans Lentiviral Packaging Kit）包含:慢病毒包裝質(zhì)粒、對(duì)照質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑（EZ Trans Regent）等三個(gè)組份。和元李記慢病毒包裝試劑盒，提供足量、優(yōu)質(zhì)的對(duì)照質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒，省去實(shí)驗(yàn)人員抽提質(zhì)粒的工作。

和元李記慢病毒載體表達(dá)系統(tǒng)由pLenti慢病毒載體和Lentiviral Mix質(zhì)粒組成。pLenti慢載體中含有HIV基本元件5’LTR和3’LTR以及WPRE等其他輔助元件，表達(dá)框?yàn)?span>U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro，含綠色熒光和puro真核抗性?？蛻艨梢愿鶕?jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康尼槍?duì)plenti載體改造用于啟動(dòng)子、基因功能功能研究，穩(wěn)定株篩選等。Lentiviral Mix能夠表達(dá)病毒包裝需要的各種必需原件，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統(tǒng)。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。A、B組分-20℃保存，C組分4℃保存，有效期12個(gè)月。

使用方法

以10 cm培養(yǎng)皿為例（1皿為1T）

1.        細(xì)胞準(zhǔn)備：293T細(xì)胞按照6×10⁵cells/mL的細(xì)胞密度傳代到10cm培養(yǎng)皿中，第二天細(xì)胞長(zhǎng)到80%-85%時(shí)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。

2.        轉(zhuǎn)染前換液：轉(zhuǎn)染前1h將需要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞更換新鮮的DMEM，10mL/皿。

3.        轉(zhuǎn)染：

1)        取1.5mL EP管記為質(zhì)?；旌弦?span>(管A)，加入500uL DMEM，16μg質(zhì)粒DNA（可自行改造）和22μg包裝質(zhì)粒，振蕩混勻；

2)        另取1.5mL EP管記為轉(zhuǎn)染試劑混合液（管B），加入500uL DMEM，90μL 轉(zhuǎn)染試劑，振蕩混勻。

3)        再將管B緩慢加入到管A中，輕輕混勻，靜置8min形成復(fù)合物，后將混合液均勻滴加到提前換好液的10cm培養(yǎng)皿中，輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

4.        轉(zhuǎn)染后換液：轉(zhuǎn)染后6-8h,將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基吸掉，棄于廢液杯中，然后加入10mL 培養(yǎng)基（含有血清和抗生素）繼續(xù)培養(yǎng)。

5.        病毒收集：轉(zhuǎn)染48h后，吸取上清液于50mL 離心管中，4000rpm離心10min, 4℃，將上清液用0.45um過(guò)濾器過(guò)濾轉(zhuǎn)移到新的50mL 離心管中。此時(shí)上清液中的病毒顆粒可以直接去檢測(cè)滴度或者感染目的細(xì)胞，如果對(duì)病毒的滴度及純度有較高要求，可進(jìn)行后續(xù)操作。

6.        病毒濃縮（可選）：每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒濃縮液（CAT:AC04L442），混勻，4℃放置2h，4000rpm離心30min，吸棄上清。

7.        病毒分裝及保存（可選）：吸取EZ慢病毒凍存液（CAT:AC04L453）1mL重懸上述病毒濃縮沉淀，輕輕混勻后-80℃保存。病毒溶液可分裝保存，避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1.      本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.      所有慢病毒操作均應(yīng)盡量在BSL2*生物安全柜中進(jìn)行，并佩戴一次性醫(yī)*口罩和手套。

3.      病毒切忌反復(fù)凍融，凍融一次病毒滴度降低10%-20%左右。

4.      病毒儲(chǔ)存6個(gè)月后，建議在使用前重新測(cè)定病毒滴度。

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